非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是全球范围内普遍存在的慢性肝病类型之一，其发病率持续攀升，已成为一个重要的公共卫生挑战。该病的主要成因是能量摄入与消耗之间的失衡，导致肝脏内脂肪过度累积，与代谢综合征的特征紧密相关。NAFLD涵盖了从脂肪变性到非酒精性脂肪性肝炎（NASH）、纤维化，最终可能发展为肝硬化、肝细胞癌（HCC）、终末期肝病乃至死亡等一系列广泛的组织病理学变化。

（银丹心脑通方，YDX）常用于治疗因代谢紊乱导致的高脂血症、冠状动脉疾病、心绞痛及脑动脉硬化症。有团队在该配方中鉴别出124种化合物，并首次观察到YDX干预显著抑制了高脂饮食（HFD）诱导的NAFLD小鼠模型中NAFLD的发展。尽管如此，YDX改善NAFLD的具体机制尚未明确。

近日，一篇名为“Multi-omics joint analysis reveals that the Miao medicine Yindanxinnaotong formula attenuates non-alcoholic fatty liver disease”的文章探讨了YDX治疗NAFLD的潜在机制。

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YDX降低HFD诱导的NAFLD小鼠的体重和肝脏脂肪堆积

为探究YDX对NAFLD的治疗效果，研究对C57BL/6J小鼠进行了为期十周的HFD饲养。自第六周起，HFD组小鼠的体重显著高于YDX-H组（图2A-B）。经十周的YDX干预后，YDX-L组（41.12±2.04g）和YDX-H组（37.25±2.35g）的体重增加趋势均低于HFD组（43.43±3.02g）。体重变化的一致性表明，YDX的剂量依赖性逆转了HFD诱导的附睾脂肪重量增加（图2C）。此外，与各组小鼠的图像相符，HFD组的肝脏重量和肝脏指数显著高于对照组（P<0.001），而YDX治疗显著逆转了这一趋势（图2D-E）。

同样，HFD组小鼠的肝脏形态粗大、体积增大、外观呈淡黄色，YDX干预后显著缓解了上述症状（图2F）。结果显示，HFD喂养的NAFLD小鼠肝脏出现气球变性、过多脂滴和炎性细胞浸润（图2G-H，蓝黑箭头所示），表明HFD诱发了肝脏脂肪变性和炎性病灶。YDX组的肝脏切片显示出非常轻微的肝脏脂肪变性和炎症病灶，特别是在高剂量组。综上所述，YDX能有效减轻HFD喂养的NAFLD小鼠的肝脏脂肪变性和炎症浸润。

图2 YDX对HFD诱导的NAFLD小鼠的影响

YDX可改善高脂饮食诱导的NAFLD小鼠的血清生化指标

为探究YDX对脂质稳态的影响，研究对小鼠血清脂质指标进行了检测。与HFD组相比，随着YDX剂量的增加，NAFLD小鼠血清中的甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平显著降低，而高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平则与YDX剂量呈正相关（图3A）。同时，HFD组小鼠血清葡萄糖和胰岛素水平分别比空白对照组高出0.69倍和1.04倍，而YDX治疗后这些变化可逆转，并呈现出剂量依赖性（图3B-C）。与药物治疗相比，低剂量和高剂量YDX均显著降低了HFD组小鼠的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）（图3D）。

此外，通过口服葡萄糖耐量试验（OGTT），研究进一步检测了HFD组小鼠在服用YDX药物10周后的葡萄糖清除能力。腹腔注射葡萄糖（1.5gkg-1）后，随着时间的延长，YDX治疗组的血糖水平降低，在120分钟时，高剂量YDX组的血糖含量与对照组相似（图3E）。OGTT的曲线下面积（AUC）变化表明，与对照组相比，YDX治疗显著提高了HFD诱导的NAFLD小鼠的葡萄糖清除能力（图3F）。这些数据表明，YDX能够逆转HFD诱导的小鼠因血脂水平失调引起的胰岛素敏感性和葡萄糖耐量的损伤。

随后，研究探讨了YDX对HFD诱导的NAFLD小鼠因脂质代谢紊乱引起的肝损伤的影响。与对照组相比，HFD组小鼠的血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平分别显著升高了66.05%和63.9%（图3G）。尽管如此，YDX治疗仍能显著改善这些变化。与HFD组相比，高剂量YDX干预组的血清AST和ALT水平分别降低了36.2%和38.11%。与血清肝功能指标水平的变化一致，HFD组小鼠口服YDX可显著降低血清丙二醛（MDA）水平（P<0.01，P<0.001），且呈剂量依赖性（图3H）。

作为抗氧化系统的关键指标，与HFD组相比，谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽（GSH/GSSG）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）的水平随着YDX剂量的增加而显著上升（图3I-J）。与对照组相比，HFD饲喂导致血清中内毒素（LPS）水平明显升高，而与HFD组相比，YDX组则显著降低了血清中LPS的含量（图3K）。同时，HFD组小鼠血清中炎症细胞因子白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平显著升高（P<0.001），而YDX组小鼠中IL-6和TNF-α的水平显著低于HFD组（图3L-M）。

图3 YDX对HFD诱导的NAFLD小鼠血清生化指标和糖耐量的影响

YDX调节HFD诱导的NAFLD小鼠的肠道菌群

研究还选取了对照组、HFD组及YDX处理组（每组n=5），采用16S rRNA测序技术对肠道微生物群落进行了分析。与对照组相比，HFD诱导的NAFLD小鼠肠道微生物群落的α多样性显著降低，而YDX处理组在治疗后能够恢复其多样性（图4A-C）。同时，研究进行了β多样性测定来探究不同样本间肠道微生物群落结构的差异。通过OPLS-DA、PCoA和NMDS的OTU水平分析，对照组与HFD组的肠道微生物群落存在显著差异，而YDX组与对照组则较为接近，表明HFD喂养小鼠的肠道微生物群落经YDX治疗后趋向于恢复正常水平（图4D-F）。结果显示，YDX对HFD诱导的NAFLD小鼠肠道微生物群落紊乱具有显著的恢复作用。

此外，图4G展示了在门水平上，拟杆菌门、疣微菌门、脱铁杆菌门、变形菌门和厚壁菌门是主要的微生物群落，它们在不同组别小鼠肠道微生物群落中的相对丰度存在显著差异。在研究中，HFD组的F/B比值较对照组降低了60.73%，而YDX治疗后F/B比值显著升高（P<0.05）（图4H）。从菌属水平来看，HFD组小鼠中普氏梭杆菌、醋杆菌、颤螺菌、脱硫弧菌、臭杆菌、沙氏粘螺菌和另枝菌属的相对丰度显著低于对照组，而巴氏杆菌、罗斯氏菌和梭菌簇XIVa的相对丰度显著高于对照组（图4I-J），YDX干预显著逆转了这一变化。

同时，线性判别分析（LDA）和效应大小测量（LEFSe）显示有27个高维生物标志物在从门到属的水平上显示出统计学显著性和生物学一致性差异（LDA score>4）（图4K），该分析表明有5个的LDA值大于5.0。这些结果表明，YDX能够调节肠道微生物群落的丰度，从而改善HFD所致NAFLD小鼠的肝损伤。

图4 YDX对NAFLD小鼠肠道微生物群多样性和群落丰富度的影响

结论

综上所述，研究显示YDX在缓解由HFD诱导的NAFLD方面具有显著的积极作用，这可能为NAFLD的临床治疗提供一种潜在的新策略。

参考文献：

Huang L, Rao Q, Wang C, Mou Y, Zheng X, Hu E, Zheng J, Li Y, Liu L. Multi-omics joint analysis reveals that the Miao medicine Yindanxinnaotong formula attenuates non-alcoholic fatty liver disease. Phytomedicine. 2024 Dec;135:156026. doi: 10.1016/j.phymed.2024.156026