结直肠癌（CRC）是全球范围内最为常见的癌症诊断类型之一，除了遗传易感性之外，多项研究表明肠道微生物群失衡及代谢紊乱与CRC起始和进展之间有紧密联系。此外，流行病学研究认为高脂饮食（HFD）也是CRC发展的一个重要促进因素，HFD能够加剧肠上皮性炎症，并损害肠屏障的完整性，从而可能加速CRC的发展进程。

香连丸（XLP），被广泛应用于胃肠道疾病的治疗中，在调节肠道菌群失衡与减轻炎症反应方面，具有显著疗效与优势。然而，尽管XLP在医学领域具有广泛的应用价值，但在针对HFD相关性CRC的治疗效果上，尚存在较大的未知领域，有待进一步的科学研究与探索。

日前，一篇名为“Traditional medicine Xianglian pill suppresses high-fat diet-related colorectal cancer via inactivating TLR4/MyD88 by remodeling gut microbiota composition and bile acid metabolism”的文章探讨了XLP拮抗HFD相关CRC的抗癌机制。

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XLP抑制HFD相关结直肠肿瘤的发生

为了探究XLP在HFD诱导的结直肠肿瘤发生过程中的潜在影响，研究构建了CRC小鼠模型，并按照相关方案进行处理（图2A），结果显示，三组小鼠总生存时间之间的显著差异（图2B）。且XLP的给药呈现出剂量依赖性的效果，显著抑制了小鼠的体重下降（图2C）。与此同时，XLP干预在防止结肠缩短和减少肿瘤数量方面也表现出显著的有效性（图2D）。HE及Ki-67染色结果显示，XLP处理显著改善了结肠的组织学损伤，并抑制了细胞的异常增殖（图2E）。

鉴于巨噬细胞极化状态与肠道炎症在结直肠癌进展中的紧密联系，研究进一步探究了XLP对HFD相关肠道炎症中巨噬细胞极化的影响。结果显示，与仅接受HFD喂养的CRC小鼠相比，XLP处理的小鼠结肠中巨噬细胞CD86的表达显著降低，而CD206的表达则未见明显变化（图2F）。此外，XLP还显著降低了血清和结肠中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的水平（图2G），这可能与其抗炎作用相关。

安全性评估方面，研究检测了小鼠的血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）以及肌酸酐（CREA）水平来检测肝肾功能的状况。结果显示，在HFD组和XLP处理组之间，上述指标均未观察到显著差异（图2H），从而强调了XLP在处理过程中的安全性。

图2 XLP抑制HFD相关的结直肠癌，减轻结肠促炎巨噬细胞浸润

XLP抑制TLR4/MyD88通路的激活，改善炎症，维持黏膜屏障完整性

免疫荧光染色及蛋白质印迹分析均明确显示，相较于XLP-L组，HFD组结肠组织中的TLR4与MyD88表达水平显著上升（图3A-B）。针对XLP的抗炎特性研究，研究着重评估了血清与结肠中炎症细胞因子的含量变化。XLP给药后，血清中的IFN-γ、IL-17及IL-1β水平均呈现下降趋势（图3C）。此外，XLP还显著抑制了结肠中IL-6、TNF-α及切割型IL-1β的表达，而IL-1β整体水平则未见显著波动（图3D）。

为进一步验证XLP对黏膜屏障完整性的修复作用，研究检测了结肠组织中紧密连接蛋白的表达情况。结果显示，XLP-L组小鼠的Zonula Occludens-1（ZO-1）及occludin蛋白表达均显著增强（图3E）。鉴于腺瘤的形成与异常细胞增殖密切相关，研究进一步检测了增殖细胞核抗原（PCNA）的蛋白表达水平，并分析了与WNT信号通路相关的RNA表达情况。结果显示，与HFD组相比，经XLP处理的小鼠体内PCNA蛋白水平及β-连环蛋白、Axin2、WNT10a、WNT6、cMyc等基因的RNA表达水平均显著降低（图3F-3G）。

图3 XLP抑制TLR4/MyD88通路，改善结肠炎症和肠道屏障功能障碍

XLP恢复HFD相关CRC的代谢功能障碍

鉴于肠道微生物群相关代谢产物变化在CRC发展中扮演重要角色，研究对HFD和XLP-L组粪便样本进行了深入的代谢分析。PCA与PLS-DA分析显示，代谢产物在HFD与XLP-L组之间具有显著区分（图4A）。富集分析结果显示，在这些途径中，XLP显著抑制了次级代谢产物的生物合成及胆汁分泌过程（图4B-C）。

基于上述发现，研究进一步聚焦于胆汁酸相关代谢产物（图4D），并详细分析了其在粪便中的具体变化。具体而言，XLP处理显著降低了粪便中胆酸、脱氧胆酸、鹅去氧胆酸及牛磺胆酸的水平（图4E）。同时，在结肠组织中，脱氧胆酸水平亦受到XLP的显著抑制（图4F）。

为深入揭示肠道微生物群改变与代谢变化之间的内在联系，研究进行了全面的相关性分析。结果显示，粪便样本中的微生物组与代谢组之间存在显著的正相关或负相关关系（图4G）。

综上所述，肠道微生物群与胆汁酸代谢之间的复杂相互作用，可能为XLP在HFD相关CRC抑制中的治疗机制提供了重要线索。

图4 XLP改变肠道微生物相关代谢物

XLP抑制肿瘤形成：肠道微生物群和细菌衍生代谢产物

在确认XLP对CRC进展具有抑制效应的基础上，研究进一步构建了“伪无菌”小鼠模型，通过定期给予抗生素处理，以深入研究肠道微生物群落对CRC的潜在促进作用（图5A）。Abx组与Abx+XLP组的体重及肠腺瘤分析结果显示两者之间并无显著性统计学差异（图5B、C），但Abx+XLP组的结肠长度相较于Abx组有所延长，这一发现暗示了XLP在特定条件下可能产生了微妙的生物学效应。

此外，通过免疫组织化学分析，研究观察到Abx组与Abx+XLP组在病理评分以及PCNA、TLR4、MyD88等关键蛋白的表达水平上，均未呈现出具有统计学意义的差异（图5D）。Western blot分析也进一步证实了PCNA、occludin、活性β-catenin及切割型IL-1β等蛋白质在两组结肠组织中的表达水平同样未表现出统计学上的显著差异（图5E）。此外，两组间结肠组织中的DCA水平亦无统计学差异（图5F）。综上所述，这些发现提示其可能通过调节肠道菌群及衍生代谢产物来发挥抗肿瘤活性作用。

图5 XLP抑制涉及微生物依赖成分的HFD相关CRC

结论

总之，XLP能够有效恢复肠道微生物群的失调状态，维护肠道屏障的完整性，对抑制CRC的发展具有关键作用。

参考文献：

Ye C, Wu C, Li Y, Chen C, Li X, Zhang J, Xu Z, Chen H, Guo Y. Traditional medicine Xianglian pill suppresses high-fat diet-related colorectal cancer via inactivating TLR4/MyD88 by remodeling gut microbiota composition and bile acid metabolism. J Ethnopharmacol. 2024 Oct 28;333:118411. doi: 10.1016/j.jep.2024.118411