缺血性中风（IS）作为导致人类死亡与长期残疾的主要诱因，对全球经济构成了显著负担。IS的病理机制中，血管阻塞现象尤为关键，其阻碍了脑部氧气供应，进而引发严重的脑功能障碍。当前，针对IS的主要治疗方法受限于较为狭窄的治疗时间窗，从而在实际临床应用中受到一定制约。鉴于此，迫切需求探索并开发出既安全又高效的IS新型治疗策略。

桃红四物汤（THSWD），源自清代医学巨著《医宗金鉴》，具有“化瘀生新”之功。其方剂构成严谨，包含桃仁、红花、当归、生地黄、川芎及芍药等六味药材。作为一味成分复杂的传统中药，THSWD在医学领域展现出了广阔的应用前景，特别是在通过多途径调节机制，包括促进血管生成等方面，被期望能有效减轻脑缺血-再灌注损伤（CIRI）的病理过程。然而，尽管THSWD在治疗领域展现出了潜力，但关于其对新生血管结构与功能的保护性作用及其背后的分子机制，目前尚未有详尽且公开的科研成果。

近日，一篇名为“Treating ischemic stroke by improving vascular structure and promoting angiogenesis using Taohong Siwu Decoction: an integrative pharmacology strategy”的文章探讨了THSWD对新生血管结构和功能的相关保护作用及分子机制。

图1 论文首页

THSWD可改善MCAO/R大鼠的脑损伤

成功构建MCAO/R模型后，研究运用THSWD和NBP对其治疗效果进行了严谨的评估。结果显示，模型组大鼠的BMI在初期（第1-3天）呈现稳步下降趋势，随后（第4-7天）略有回升。相比之下，THSWD和NBP治疗均显著改善了模型组大鼠的BMI表现（图2A）。

为了全面评估神经功能障碍，研究进一步采用了Longa评分、平衡木测试及转弯测试。Longa评分分析明确指出，模型组大鼠存在严重的神经功能障碍，而经THSWD或NBP治疗后，评分显著下降至1-2分区间（图2B）。此外，这两项治疗均显著提升了大鼠的运动协调性和平衡能力（图2C）。转弯测试的结果也显示，与模型组相比，接受高剂量THSWD和NBP治疗的大鼠，其转向与损伤相反一侧的倾向得到了显著减轻（图2D）。

组织病理学层面，HE染色结果显示，THSWD和NBP治疗有效改善了大脑皮层的病理损伤和坏死情况（图2E）。更为显著的是，与模型组相比，THSWD和NBP的干预均导致了梗死体积的显著减少（图2F-G）。综上所述，THSWD在MCAO/R大鼠中展现出了优异的神经保护作用。

此外，研究还深入探讨了血管功能相关因子的变化。ET1作为一种强烈的血管收缩剂，其表达在模型组中显著增加，同时伴随着脑血流的下降。相反，PDGFB和Ang1作为血管成熟的关键因素，其表达在模型组中显著降低。然而，高剂量的THSWD或NBP有效逆转了ET1表达的升高以及PDGFB和Ang1表达的降低（图2H-J）。进一步证实了THSWD在减轻血管结构损伤及恢复MCAO/R大鼠脑血流方面具有积极作用。

图2 THSWD减轻MCAO/R大鼠的脑损伤

THSWD可改善新生血管的结构和功能

研究采用了LDF、Evans blue染色以及免疫荧光染色技术来进行验证。具体而言，LDF分析结果显示，与假手术组相比，模型组大鼠的脑区血流灌注呈现出显著的降低趋势。然而，中剂量及高剂量的THSWD治疗则有效地促进了血流灌注的恢复（图3A、E）。伊文思蓝染色结果表明，THSWD在缓解MCAO/R大鼠的血脑屏障（BBB）渗漏方面展现出了显著的效果（图3B、F）。值得注意的是，THSWD还显著上调了ZO1（图3C、G）和Occludin（图3D、H）的表达水平，这两种分子对于维护MCAO/R大鼠缺血侧皮质的BBB功能具有至关重要的作用。因此，可以推测，THSWD通过减轻MCAO/R大鼠的BBB损伤，从而达到了增强血流灌注的目的。

图3 THSWD恢复脑血流供应并改善BBB损伤

鉴于基底膜的完整性和周细胞粘附在维护血管结构和功能中的核心地位，研究进一步采用了免疫荧光双标记技术，对新生血管数量（以CD31/Ki67为标记）、血管基底膜损伤（以CD31/CollagenaseIV为标记）以及周细胞覆盖程度（以CD31/PDGFRβ为标记）进行了深入的评估。结果显示，无论是THSWD还是NBP治疗，均导致了CD31/Ki67、CD31/CollagenaseIV以及CD31/PDGFRβ表达的显著增加（图4A-F），这充分证明了THSWD在增强血管结构稳定性和促进血管生成方面的巨大潜力。

图4 THSWD改善了新生血管的结构

网络药理学分析

为了深入研究THSWD在促进血管生成方面的潜在机制，研究借助了DAVID数据库对筛选出的靶标进行了功能富集分析（图5）。结果显示，显著富集的GO生物过程主要包括炎症反应、细胞增殖与迁移的正向调控、凋亡过程及脂质代谢等关键生物活动。此外，在GO细胞成分层面，质膜、细胞溶胶及细胞质等结构也呈现出显著富集。在GO分子功能方面，ATP结合、蛋白激酶活性及氧化还原酶活性等功能占据重要地位。

进一步地，KEGG富集分析揭示了THSWD与多种代谢途径（如核苷酸代谢、嘌呤代谢、花生四烯酸代谢等）及信号通路（包括HIF-1、Notch、VEGF等信号通路）之间的显著关联。同时，与血管生成紧密相关的生物过程，如粘着斑形成、血管平滑肌收缩、血小板活化等，亦在本次分析中展现出显著的相关性。

综合GO与KEGG的联合分析结果，研究初步推断THSWD在促进血管生成方面的功效可能与其对血管代谢紊乱的调控作用密切相关。这一发现为进一步探索THSWD的生物学功能及潜在应用提供了重要线索。

图5 THSWD促进IS血管生成的网络药理学分析

结论

总之，该研究深入探讨了THSWD对IS新生血管结构与功能的保护作用，并揭示了其潜在的分子机制。这一发现为中医药在IS治疗领域的应用提供了新的思路与途径，展示了中医药在治疗此类疾病中的潜力和价值。

参考文献：

Tang L, Wang D, Chang H, Liu Z, Zhang X, Feng X, Han L. Treating ischemic stroke by improving vascular structure and promoting angiogenesis using Taohong Siwu Decoction: An integrative pharmacology strategy. J Ethnopharmacol. 2024 Oct 5;332:118372. doi: 10.1016/j.jep.2024.118372